Лабораторная диагностика

Как отмечалось выше, вирус СПИД может быть обнаружен во всех биологических жидкостях больного СПИД. Непосредственное выделение вируса, его пассирование и идентификация являются кропотливой и дорогой процедурой и не могут быть использованы в повседневной работе врачей. Простым и эффективным методом современной диагностики СПИД является выявление специфических антител к вирусу HIV. Наиболее ранние сроки обнаружения антител к вирусу HIV - 3-4 нед со дня заражения.

У больных с выраженной симптоматикой антитела обнаруживаются в 90-95% случаев, в терминальной стадии - в 50-60%.

В настоящее время в СССР разработаны иммуноферментные тест-системы для определения антител к вирусу СПИД, которые выпускаются предприятием "Антиген" (г. Электрогорск). Данная система представляет собой десятикомпонентный комплекс, основным реагентом которого является концентрированный очищенный антиген вируса СПИД, сорбированный на поверхности лунок полиетироловых пластин. Один набор рассчитан на 180 исследований.

Результаты иммуноферментного метода учитывают спектрофотометрически при длине волны 492 нм, а при отсутствии спектрофотометра - визуально. Исследуемая сыворотка расценивается как положительно реагирующая, если значение оптической плотности при ее взаимодействии с вирусным антигеном превосходит не менее, чем в три раза, аналогичный показатель в контроле отрицательной сыворотки. При визуальном учете реакция считается положительной, если имеются отчетливые различия в интенсивности окрашивания при реакции испытуемой сыворотки по сравнению с контрольной отрицательной сывороткой.

При обнаружении положительно реагирующей сыворотки данный образец исследуют повторно. При повторном получении положительного результата с помощью иммуноферментного анализа проверяют новую порцию сыворотки того же человека. Если и в этом случае результат будет положительный, сыворотку исследуют дополнительно методом иммунного блотинга или иммунофлюоресценции.

Если при повторном исследовании или при исследовании новой порции сыворотки от того же человека получен отрицательный результат, а также при отрицательном результате анализа сыворотки методом иммунного блотинга, сыворотка признается не содержащей антител к вирусу СПИД.

Существенным недостатком иммуноферментного анализа является значительное количество ложноположительных реакций с сыворотками крови больных другими заболеваниями. Исследования показали, что ложноположительные реакции часто обусловлены изогемагглютининами и антилимфоцитарными антителами, которые появляются у больных с аутоиммунными процессами.

Частота ложноположительных реакций существенно возрастает при исследовании длительно хранившихся сывороток, а также сывороток, подвергающихся многократному замораживанию.

Иммуноблотинг - тестирование на наличие антител к отдельным вирусным антигенам - является специфическим и применяется для обследования лиц, серопозитивных при обследовании с помощью иммуноферментного анализа.

Методика идентификации вирусспецифических белков HIV определяет белки сердцевины и поверхностной оболочки вируса СПИД - р15 -18, р24-25, р41-45, р53-55, р64.

Белки р24 и р55 появляются раньше других белков при сероконсервации, в то время как р41 чаще определяется у больных СПИД.

Гликопротеиды с высокой молекулярной массой 120, 160 определяются методом иммуноблотинга. Наличие гликопротеидов скорее всего является индикатором первичной инфекции и началом продукции антител.

Положительным результатом анализа исследуемого образца сыворотки следует считать выявление антител к вирусным белкам р41, р110.

Ложноположительные сыворотки в иммуноблотинге выявляются с частотой 1:4. Неспецифическое взаимодействие антител происходит с вирусными белками р18, р24-25 и р55. Часто ложноположительные реакции с белками р18 и р24 выявляются при постановке иммуноблотинга с сыворотками африканского происхождения, ассоциированные с малярией. Иммуноглобулины, специфичные к возбудителю малярии, регулярно выявляются в сыворотках, демонстрирующих ложноположительные реакции по антителам к HIV.

Опасность ложноположительных реакций заставляет специалистов использовать разнообразные методы к повышению достоверности получаемых результатов. Для этого применяют различные модификации иммуноблотинга, реакции конкурентного иммуноферментного анализа, радиоиммунопреципитации, прямой и непрямой иммунофлюоресценции.

Для косвенного подтверждения диагноза СПИД могут быть использованы общие иммунологические реакции: определение общего количества лимфоцитов и числа Т-хелперов (оба показателя снижены); соотношение Т-хелперы: Т-супрессоры (у здоровых лиц 1,8-2,2; у больных СПИД - меньше 1,0); уменьшение числа естественных киллеров; уменьшение выработки экдогенного интерферона"

Следует учитывать повышение уровня сывороточных иммуноглобулинов в сыворотке крови.

При внутрикожном введении различных бактериальных или грибковых антигенов отмечается снижение интенсивности аллергических реакций и нередко отсутствие отрицательных результатов тестов с туберкулином, бластомицином, гистоплазмином, кондидином, трихофитином, кокцидиоидином.